Electroforesis
Electrophoresis. Técnica para separar moléculas iónicas mediante la migración diferencial en un soporte sólido de acuerdo con el tamaño y la carga iónica de las moléculas en el campo eléctrico. Las moléculas separadas se localizan mediante su teñido o revelado.
Un método que permite separar grandes moléculas (como proteínas o fragmentos de DNA) en una mezcla de moléculas similares. Se pasa una corriente eléctrica por el medio de suspensión y cada molécula. «viaja» por el medio a velocidades diferentes que dependen de su tamaño y carga eléctrica. La separación se basa en estas diferencias. La agarosa y los geles de acrilamida se usan comúnmente para separar ácidos nucleicos y proteínas.
Electroforesis en gel con gradiente desnaturalizante
Denaturing gradient gel electrophoresis (DDGE). Técnica para detectar sustituciones de una sola base en fragmentos de DNA. Las dos cadenas de DNA se disocian al aumentar la concentración de un agente desnaturalizante como la urea, comenzando por las regiones que están unidas más débilmente. Como la unión entre el par AT es más débil que la del par GC, las regiones ricas en AT tienden a separarse antes en estas condiciones desnaturalizantes. Cuando se somete a un DNA de doble hélice a una electroforesis en gradiente desnaturalizante, en el punto en el que las cadenas comiencen a separarse la velocidad de migración se reduce brúscamente debido a la configuración más relajada del dúplex. Si el fragmento de DNA contiene un mal apareamiento en una región de la molécula que se desnaturaliza pronto, se altera el perfil electroforético cuando se compara con el de un homoduplex de cadenas perfectamente complementarias.
Electroforesis en gel con campo pulsante
Pulse-field gel electrophoresis (PFGE). Técnica que se emplea para separar moléculas de DNA de tamaño superior a 20 kb, ya que la electroforesis en gel de agarosa al 0,5 1,0% no separa las moléculas mayores de este tamaño.
Se utilizan alteraciones frecuentes de la dirección del campo eléctrico. Existen diferentes formas prácticas para esta técnica, las dos más generales son:1. Electroforesis de gradiente en gel con campo pulsante (Pulse field gradient gel electrophoresis). Utiliza al menos dos campos eléctricos alternativos que se cruzan en el plano del gel.
2. Electroforesis en gel con inversión de campo (Field inversion gel electrophoresis). Utiliza un sólo campo eléctrico cuya polaridad se invierte periódicamente.